Azul de metileno en solución según Löffler
- Principio
El azul de metileno, cuyo nombre científico es cloruro de metiltionina, es un colorante orgánico.
Es un compuesto químico heterocíclico aromático con fórmula molecular: C16H18ClN3S.
- Preparaciones
Fórmula:
Para la realización de la tinción se utiliza una solución de azul de metileno según Löffler preparada del siguiente modo:
Etanol 95 %
Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden:
Etanol
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95 g
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Agua destilada
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5 ml
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mezclar
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Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa
Para la preparación de aproximadamente 1000 ml de solución se añaden:
Potasio hidróxido en lentejas
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1g
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Agua destilada
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1000 ml
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disolver revolviendo
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Solución de azul de metileno según Löffler
Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden:
Azul de metileno (C.I.52015) Certistain®
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0,3 g
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Etanol 95 %
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30 ml
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Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa
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añadir a 100 ml
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mezclar
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La solución de colorante recién preparada debe filtrarse antes de su uso.
Procedimiento:
Tinción en el banco de tinción
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos indicados.
Portaobjetos con frotis fijado
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Fucsina fenicada en solución según Ziehl- Neelsen
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cubrir completamente,
calentar 3 veces con cuidado por abajo sirviéndose del mechero de Bunsen hasta que se produzca vapor
¡La solución de tinción no debe hervir!
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teñir du- rante
5 minutos en total |
Agua corriente
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enjuagar hasta que ya no se despren- dan nubes de color
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Ácido clorhídrico- alcohol
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cubrir completamente y dejar actuar
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15 - 30 segundos*
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Agua corriente
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enjuagar inmediatamente
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Solución de azul de metileno según Löffler
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contratinción, cubrir completamente y dejar actuar
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30 segundos**
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Agua corriente
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enjuagar cuidosamente
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Secar al aire (p. ej. durante la noche o a 50°C en el armario de secado)***
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* en dependencia del espesor del material
** o 1 minuto con Azul de metileno en solución según Löffler diluido (dilución: 1:10 (1+9) con agua destilada)
*** Los preparados histológicos no son secados al aire, mas pueden ser montados y almacenados con medios de montaje anhidros (p.ej. Neo-Mount®, Entellan®, DPX nuevo o Entellan®Nuevo) y cubreobjetos después de la deshidratación (series de alcohol ascendentes) y la clarificación con xileno o Neo-Clear®.
Preparación 2.
Fórmula:
Fucsina básica fenicada de Zielhl:
- Fucsina diamante.
- Alcohol etílico de 96º.
- Solución de fenol 5% en H20 destilada.
Disolver la fucsina en el alcohol, y añadir después la solución de fenol.
Azul de Metileno Loeffler:
- Azul de Metileno.
- Alcohol etílico de 96º.
- Solución de KOH al 0,01%.
Procedimiento:
Preparación y fijación de las extensiones
- Colocar en el portaobjetos una gota de agua con el asa.
- Con el asa flameada y fría, tomar una porción del cultivo bacteriano y suspenderlo homogéneamente en la gota de agua.
- Extender la suspensión sobre la superficie del portaobjetos.
- Secar la preparación al aire, o bien calentando muy suavemente a cierta distancia de la llama del mechero.
Fijar la extensión al portaobjetos por el calor (pasar el porta dos o tres veces a través de la llama del mechero, con la ayuda de las pinzas.
Tinción de las extensiones
Cubrir la extensión con alguno de los siguientes colorantes:
Lavar abundantemente con agua.
Secar la preparación suavemente con papel de filtro.
Fuente: https://www.ugr.es/~cjl/tinciones.pdf
A continuación os dejo un video interesante respecto al Azul de Metileno:
Cubrir la extensión con alguno de los siguientes colorantes:
- Azul de Metileno de Loeffler durante 2 minutos.
- Fucsina diluida (con agua sobre el portaobjetos) durante 3 segundos.
Lavar abundantemente con agua.
Secar la preparación suavemente con papel de filtro.
Fuente: https://www.ugr.es/~cjl/tinciones.pdf
A continuación os dejo un video interesante respecto al Azul de Metileno:
Fuente: https://www.youtube.com/watch?v=NLRoX4eCeZo
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