Azul de metileno en solución según Löffler

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  • Principio
El azul de metileno, cuyo nombre científico es cloruro de metiltionina, es un colorante orgánico.
Es un compuesto químico heterocíclico aromático con fórmula molecular: C16H18ClN3S.

  • Preparaciones
Preparación 1.

Fórmula:
Para la realización de la tinción se utiliza una solución de azul de metileno según Löffler preparada del siguiente modo: 

Etanol 95 % 
Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden: 
Etanol 
95 g 
Agua destilada 
5 ml 
mezclar 

Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa 
Para la preparación de aproximadamente 1000 ml de solución se añaden: 
Potasio hidróxido en lentejas 
1g 
Agua destilada 
1000 ml 
disolver revolviendo 

Solución de azul de metileno según Löffler 
Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden: 
Azul de metileno (C.I.52015) Certistain® 
0,3 g 
Etanol 95 % 
30 ml 
Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa 
añadir a 100 ml 
mezclar 

La solución de colorante recién preparada debe filtrarse antes de su uso. 
Procedimiento:

Tinción en el banco de tinción 
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos indicados. 
Portaobjetos con frotis fijado 
Fucsina fenicada en solución según Ziehl- Neelsen 
cubrir completamente,
calentar 3 veces con cuidado por abajo sirviéndose del mechero de Bunsen hasta que se produzca vapor 
¡La solución de tinción no debe hervir! 
teñir du- rante
5 minutos en total 
Agua corriente 
enjuagar hasta que ya no se despren- dan nubes de color 
Ácido clorhídrico- alcohol 
cubrir completamente y dejar actuar 
15 - 30 segundos* 
Agua corriente 
enjuagar inmediatamente 
Solución de azul de metileno según Löffler 
contratinción, cubrir completamente y dejar actuar 
30 segundos** 
Agua corriente 
enjuagar cuidosamente 
Secar al aire (p. ej. durante la noche o a 50°C en el armario de secado)*** 
* en dependencia del espesor del material 
** o 1 minuto con Azul de metileno en solución según Löffler diluido (dilución: 1:10 (1+9) con agua destilada) 
*** Los preparados histológicos no son secados al aire, mas pueden ser montados y almacenados con medios de montaje anhidros (p.ej. Neo-Mount®, Entellan®, DPX nuevo o Entellan®Nuevo) y cubreobjetos después de la deshidratación (series de alcohol ascendentes) y la clarificación con xileno o Neo-Clear®. 


Preparación 2.

 Fórmula:

 Fucsina básica fenicada de Zielhl:
  • Fucsina diamante.
  • Alcohol etílico de 96º.
  • Solución de fenol 5% en H20 destilada.

Disolver la fucsina en el alcohol, y añadir después la solución de fenol.

Azul de Metileno Loeffler:
  • Azul de Metileno.
  • Alcohol etílico de 96º.
  • Solución de KOH al 0,01%.
Disolver el colorante en el alcohol, y añadir la solución de KOH.

Procedimiento:

Preparación y fijación de las extensiones
  • Colocar en el portaobjetos una gota de agua con el asa.
  • Con el asa flameada y fría, tomar una porción del cultivo bacteriano y suspenderlo homogéneamente en la gota de agua.
  • Extender la suspensión sobre la superficie del portaobjetos.
  • Secar la preparación al aire, o bien calentando muy suavemente a cierta distancia de la llama del mechero.
Fijar la extensión al portaobjetos por el calor (pasar el porta dos o tres veces a través de la llama del mechero, con la ayuda de las pinzas.

Tinción de las extensiones

 Cubrir la extensión con alguno de los siguientes colorantes:

  • Azul de Metileno de Loeffler durante 2 minutos.
  • Fucsina diluida (con agua sobre el portaobjetos) durante 3 segundos.

Lavar abundantemente con agua.
Secar la preparación suavemente con papel de filtro.

 Fuente: https://www.ugr.es/~cjl/tinciones.pdf


 A continuación os dejo un video interesante respecto al Azul de Metileno:



Fuente: https://www.youtube.com/watch?v=NLRoX4eCeZo

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