Observación de Microorganismos

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La observación de Microorganismos, con microscopía óptica, en un laboratorio de Microbiología, puede realizarse por diferentes procedimientos como son la observación directa de microorganismos “in vivo” o el tratamiento con colorantes mediante tinción positiva y negativa, procesos dirigidos a incrementar el contraste y por consiguiente a optimizar el resultado.

A través de este blog intentaremos conocer los métodos y las técnicas más habituales para la observación de muestras con microscopía óptica.

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Clasificación de los Colorantes

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Antes de realizar una clasificación podemos definir los colorantes  ( https://www.ecured.cu/Colorante )  como sustancias de origen   químico  o biológico, generalmente tintes, pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos, debiendo tener al menos, un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir. La molécula del colorante tiene, normalmente, dos componentes importantes (desde el punto de vista químico): Cromógeno: Aporta el color. Auxocromo: Posibilita la unión a elementos del tejido. El Cromóforo (organización molecular de ntro del cromógeno), que es el responsable de la absorción de un espectro determinado de longitud de onda.  El cromóforo es todo grupo aislado, covalente e insaturado, que tiene una absorción característica en la región ultravioleta o visible; dicho de otra forma, es la capacidad que tiene la molécula para que sus electrones absorban energía o luz visible, se excit
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Azul de metileno en solución según Löffler

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Principio El azul de metileno, cuyo nombre científico es cloruro de metiltionina, es un colorante orgánico. Es un compuesto químico heterocíclico aromático con fórmula molecular:  C 16 H 18 ClN 3 S . Preparaciones Preparación 1. Fórmula: Para la realización de la tinción se utiliza una solución de azul de metileno según Löffler preparada del siguiente modo:  Etanol 95 %  Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden:  Etanol  95 g  Agua destilada  5 ml  mezclar  Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa  Para la preparación de aproximadamente 1000 ml de solución se añaden:  Potasio hidróxido en lentejas  1g  Agua destilada  1000 ml  disolver revolviendo  Solución de azul de metileno según Löffler  Para la preparación de aproximadamente 100 ml de solución se añaden:  Azul de metileno (C.I.52015) Certistain ®  0,3 g  Etanol 95 %  30 ml  Solución de potasio hidróxido 0,1 %, acuosa 
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Anaranjado G

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Principio El Anaranjado G (Orange G), también conocida como Naranja Gelb, es un valioso colorante azoico sintético utilizado en numerosas formulaciones de tinción, principalmente en técnicas histológicas. Su uso principal se encuentra en la tintura OG-6 Papanicolaou usada en la coloración de la keratina, sin embargo también es uno de los componentes principales usados en la tintura de los tests de polen. A menudo el Naranja G (Orange G) también es combinado junto a tinturas amarillentas en soluciones alcohólicas para tintar eritrocitos en métodos de tricromía, y en la demostración de células en  el páncreas y la pituitaria. Su fórmula química es C ₁₆ H ₁₀ N ₂ Na ₂ O ₇ S ₂ . Preparaciones Preparación 1. Fórmula: Solución de trabajo de Anaranjado G Para preparar aprox. 100 ml de solución se añaden juntos: Anaranjado G 0,5 g  Etanol  100 ml  disolver  Ácido fosfowolfrámico hidrato 0,015 g  añadir y revolver hasta que se haya disuelto todo 
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