Eosina A (amarillenta)
- Principio
- Preparaciones
Fórmula:
Anaranjado de Acridina 0,1 g/L
Tampón Acetato, pH 3.6 0,5M, en disolución acuosa.
Tampón Acetato, pH 3.6 0,5M, en disolución acuosa.
Procedimiento:
Para la realización de la tinción se puede utilizar una solución de eosina A lista para el uso o una solución de eosina A preparada por separado.
Solución de eosina A 0,5 %, acuosa, solución de trabajo
Para preparar aprox. 500 ml de solución se añaden juntos:
Solución de eosina A 0,1 %, acuosa, solución de trabajo
Para preparar aprox. 1000 ml de solución se añaden juntos:
La solución de colorante recién preparada debe filtrarse antes de su uso.
Ácido clorhídrico 0,1 %, acuoso
Para preparar aprox. 100 ml de solución se añaden juntos:
Fuente:
Preparación 2.
Anaranjado de acridina cloruro de cinc sal doble (C.I.46005) para microscopía Certistain®.
Solución tampón de fosfatos pH 6
Solución primaria A - tampón de dihidrogenofosfato potásico 0,1 M Para preparar aprox. 1000 ml de solución se añaden juntos:
Potasio dihidrogenofosfato
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13,61 g
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Agua destilada
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1000 ml
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disolver
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Solución primaria B - tampón de di-sodio hidrogenofosfato dihidrato 0,1 M Para preparar aprox. 1000 ml de solución se añaden juntos:
di-Sodio hidrogenofosfato dihidrato
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17,80 g
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Agua destilada
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1000 ml
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disolver
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Solución tampón de fosfatos pH 6
Mezclar 8,5 partes de la solución primaria A con 1,5 partes de la solución primaria B y filtre.
Solución de anaranjado de acridina
Para preparar aprox. 100 ml de solución se añaden juntos:
Anaranjado de acridina cloruro de cinc sal doble (C.I.46005) Certistain®
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0,1 g
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Agua destilada
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100 ml
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disolver y filtre
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La solución de colorante recién preparada debe filtrarse antes de su uso.
Solución de trabajo de anaranjado de acridina
Para preparar aprox. 100 ml de solución se añaden juntos:
Solución de anaranjado de acridina
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10 ml
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Agua destilada
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90 ml
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mezclar
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Solución de ácido acético al 1 %
Para preparar aprox. 100 ml de solución se añaden juntos:
Ácido acético 100%
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1 ml
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Agua destilada
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99 ml
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mezclar
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Solución diferenciadora de cloruro cálcico al 11 %
Para preparar aprox. 100 ml de solución se añaden juntos:
Calcio cloruro
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1,1 g
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Agua destilada
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100 ml
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disolver
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Procedimiento:
Los portaobjetos deberían ser escurridos bien por goteo después de los diferentes pasos de tinción, de esta manera se podrá evitar el innecesario arrastre de soluciones.
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos indicados.
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos indicados.
Portaobjetos con frotis fijado
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Etanol 100 %
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1 minuto
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Etanol 95 %
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1 minuto
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Etanol 80 %
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1 minuto
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Etanol 70 %
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1 minuto
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Agua destilada
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1 minuto
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Solución de ácido acético 1 %
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enjuagar brevemente
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Agua destilada
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enjuagar
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Solución tampón de fosfatos pH 6
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2 minutos
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Solución de trabajo de anaranjado de acridina
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3 minutos*
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Dejar que se escorra el colorante en exceso
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Solución tampón de fosfatos pH 6
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2 minutos
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Solución tampón de fosfatos pH 6
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2 minutos
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Incluir en tampón de fosfatos con un cubreobjetos, bordear (con laca para uñas incolora),
examinar al microscopio inmediatamente | |
* Diferenciar con solución de cloruro de calcio al 11 % si los núcleos celulares muestran fluorescencia poco nítida.
Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se recomienda el uso de aceite de inmersión.
Fuente:
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